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适应症:
在皮肤病中适用于细菌、病毒、衣原体、支原体等病原体感染的快速诊断,以及红斑狼疮、疱疹样皮炎、类天疱疮等病的诊断。
方法:
直接免疫荧光法
用以检查病人的皮肤组织中有无免疫球蛋白或补体沉积,用特异荧光抗体直接滴加于待检的标本上,由荧光标记的抗体与抗原发生特异结合。使之呈现荧光,根据荧光分布和形态确定抗原部位和性质。此法用已知的抗体检查未知的抗原,但一种标记抗体只能查一种抗原,可直接采用病人的病变组织。如:红斑狼疮、疱疹样皮炎、类天疱疮等作冰冻切片,荧光染色。此法简单、特异。
采集标本后,直接涂于载玻片上,自然干燥后,丙酮固定10分钟,待丙酮完全挥发后,加30 l特异性的荧光素标记的抗体,室温湿盒内孵育30min,使标记的抗体与抗原发生特异性结合,取出后蒸溜水冲洗去未结合的抗体,置荧光显微镜下观察。
间接免疫荧光法
用以检测病人血清中是否存在某种特异抗体或自身抗体,反应中的两对抗原抗体相对应的特异结合,而第二抗体(荧光抗体)则针对第一抗体的结合体,由于第一抗原分子可与若干个抗体分子结合,因而第二结合反应后,灵敏度大大提高。本法常用于各种自身抗体的检测。如:系统性红斑狼疮、硬皮病等。
标本采后,保存于转送培养基中,临用前混匀后取悬液涂片,固定后加入50 l用PH 7.2 PBS 1:16稀释的特异性抗体,35℃孵育30分钟,取出后用PH 9.0的0.01 M的磷酸盐缓冲液浸泡10分钟,干燥后用50 l 1:500稀释的荧光抗体(第二抗体),35℃孵育30min,蒸溜水冲洗,干燥后甘油封固加盖玻片镜下观察。
补体结合法
本法是在间接法的基础上发展而成的,即在抗原抗体反应时,加入补体,再用荧光标记的抗补体抗体进行示踪。如:检测妊娠疱疹病人的自身抗体。
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