1.开始运行仪器

　　打开电脑，打开定量PCR仪底座开关启动CFX Manager软件。

　　2.放置样品

　　将PCR反应体系加入到0.2ml低缘八联管，盖上管盖；或加入低缘96孔板，用光学级封膜封好。注意，必须带一次性塑料手套，不要让手指接触到反应管表面。将反应管按顺序放入仪器的加热孔中。

　　3.设置程序，运行实验

　　定量PCR软件操作基本步骤为：

　　a.设置热循环程序文件（Protocol Tab），点击Edit（编辑）或Create New（创建新程序）。

　　b.设置反应板文件（Plate Tab），选择本次实验所要使用的荧光染料种类；单击样品类型；如要某些反应孔第一荧光染料对应的样品类型为标准品（Standard），点击“Dilution Series”键可设置其标准品浓度及稀释倍数。。

　　c.点击“Start Run”键，单击open lid（打开热盖）或Close lid（关闭热盖）放置样品；单击Start Run，保存文件，开始运行程序。

　　4.结果分析

　　PCR反应结束后，软件会自动计算标准曲线和Ct值等。如需进行表达量分析、等位基因分析等，在软件窗口选择相应分析功能。点击右上方的“Report”键，还可输出结果报告单。

　　5.关闭运行仪器

　　实验结束后取出反应管，顺序关闭CFX Manager软件、定量PCR仪电源，关闭电脑。