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化学发光免疫分析技术又称为微量倍增技术,包括两种方法:
竞争法:多用于测定小分子抗原物质。用过量包被磁颗粒的抗体,与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育,使标记抗原与抗体(或待测抗原与抗体)结合形成复合物。
夹心法:多用于测定大分子的抗原物质。标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合,生成包被抗体-测定抗原发光抗体的复合物。仪器利用某些化学基团标记在抗原或抗体上,该化学基团被氧化后形成激发态,在返回基态的过程中释放出一定波长的光子,光电倍增管将接受到的光能转变为电能,以数字形式反映光量度,再计算测定物的浓度。
2.全自动微粒子化学发光免疫分析仪
应用经典的免疫学原理,采用单克隆抗体试剂,以磁性微粒作为固相载体,碱性磷酸酶为标物,发光剂采用3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷(AMPPD),小分子物质采用竞争法或抗体捕获法进行测定,而大分子物质采用夹心法行测定。
3.全自动电化学发光免疫分析仪
将待测标本与包被抗体的顺磁性微粒和发光剂标记的抗体混合在反应杯中共同温育,形成性微珠包被抗体-抗原-发光剂标记抗体复合物。当磁性微粒流经电极表面时,被安装在电极下的磁铁吸引住,而游离的发光剂标记抗体被缓冲液冲洗走。同时在电极加电压,使发光标记物三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+在电极表面进行电子转移,产生电化学发光,光的强度与待测抗原的浓度成正比。抑制免疫法用于小分子量蛋白质抗原检测;夹心免疫法用于大分子量物质检测。
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