将上皮组织染色液涂抹于宫颈上皮组织后，叶酸就会通过病变细胞表面的叶酸受体，迅速进入细胞浆，同时还原型的亚甲基蓝也进入细胞浆内。细胞内的pH值被乙酸降低到5.0-5.5，使叶酸复合物、还原型亚甲基蓝与叶酸受体分离。叶酸被还原成四氢叶酸，参与到一碳单位的代谢过程中。细胞内广泛存在的活性氧(ROS),则将还原型的亚甲基蓝氧化为蓝色的氧化型亚甲基蓝。细胞内的渗透压因为大量生物分子的进入而升高，使得氧化型亚甲基蓝逸出细胞外，则可在棉签上显现出颜色。如棉签无变色或淡绿色，则表明无病变细胞；如果棉签变色为蓝色、墨绿色或黑色，则提示该部位细胞表面的叶酸受体表达增高，细胞内的活性氧压增大，铁蛋白含量高，提示宫颈可能有异常病变，需要进一步检测。