光度计主要利用一束单色光以及样品对该光的吸收或透射进行测量。在光源出发后，经过调节波长选择器调节光的波长后进入样品池（经过和未经过样品的两束光线被接收到），再进入检测器检测每组不同波长（或者说不同频率的）的光的强度变化，最后通过计算样品对光的吸收率计算目标物质的浓度或其他相关参数。