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操作步骤:
试剂准备:根据试剂盒说明,将所需试剂平衡至室温,并按照比例配制Working Reagent III、IV、V等。例如,Working Reagent III需将48 T加入6 mL Reagent II,96 T加入12 mL Reagent II,充分溶解后4℃避光保存1周。
样本制备:根据样本类型(如动物组织、胃液等),称取适量样本并进行匀浆处理。例如,小鼠胃组织需按1:9的比例加入匀浆介质,4℃下研磨40 s 2次,制成10%的组织匀浆。
酶促反应:将样本与预热的Working Reagent III、IV、V等混合,置于37℃水浴中保温10分钟,摇匀后离心10分钟,取上清液用于后续测定。
测定:将上清液加入96孔板或微量比色皿中,加入Reagent II、Working Reagent V、Reagent VI等,再次混匀并测定吸光度(如580 nm或275 nm)。
结果计算:根据标准曲线计算胃蛋白酶活性单位,公式可能涉及样本蛋白浓度、反应体积、稀释倍数等因素。
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