发 热 伴 血 小 板 减 少 综 合 征 病 毒IgM 检 测 试 剂 盒 ( 酶 联 免 疫 吸 附 法 ) 说 明 书

深圳市恒昊生物科技

【产品名称】发热伴血小板减少综合征病毒IgM 检测试剂盒(酶联免疫吸附法)

【包装规格】96人份/盒

【预期用途】

本产品用于体外定性检测人血清样本中的发热伴血小板减少综合征病毒特异性|gM 抗体。

2009年至2010年，湖北、山东、河南、辽宁等6省地蜱虫叮咬导致多人出现的“发热伴血 小板综合征”病例、经中国疾病预防控制中心研究证实患者感染的是发热伴血小板减少综合征 病毒 (SFTSV)。SFTSV   感染临床潜伏期约为1～2周。急性起病，主要临床表现为发热，体温 多在38℃以上，重者持续高热，可达40℃以上，伴乏力、明显纳差、恶心、呕吐、腹泻等消化 道症状，可有单侧浅表淋巴结肿大。临床上常见血小板和白细胞减少，大多数患者很快出现多 器官功能受损，表现为血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶等水平升高，常见蛋白尿 和血尿。少数病例病情危重，出现意识障碍、皮肤瘀斑、消化道出血等，可因休克、呼吸衰  竭、弥漫性血管内凝血(DIC) 等多脏器功能衰竭死亡。绝大多数患者预后良好，既往有基础疾 病及老年患者病重症比例较高，预后较差。

【检验原理】

发热伴血小板减少综合征病毒IgM检测试剂盒(酶联免疫吸附法)是应用捕获法酶联免疫吸附 实验原理，采用抗人IgM抗体(抗μ链)包被反应板，加入待测样本和酶标抗原，形成“抗人 IgM-IgM-抗原-HRP”复合物。洗板后加入TMB底物，复合物上连接的HRP催化底物生成蓝色物质。加入终止液后变成黄色，在450nm波长处有特异吸收峰。通过吸光值高低对人血清中的发热伴血小板减少综合征病海IgM 抗体进行定性检测。

【主要组成成分】

1 包被板            96人份×1块

2阴性对照       0.2 mL/瓶×1瓶

3 阳性对照       0.2 mL/瓶×1瓶

4样品稀释液     12mL/ 瓶×1瓶

5 酶结合物        12mL/ 瓶*1瓶

6浓缩洗液(25×)30mL/瓶×1瓶

注：阴、阳性对照经过HBsAg、抗-HCV、抗-HIV检测，结果均为阴性。为了避免其中任何 潜在的生物危险，检测时应对其视为具有传染性物质，避免接触到皮肤和粘膜。

不同批号试剂盒中各组分禁止互换使用，否则会造成检测结果不准确。

【储存条件及有效期】

保存于2～8℃,有效期为12个月。

试剂盒开启使用后，请在6周(42天)内用完。

生产日期和失效日期见标签。

【适用仪器】

具有450nm 波长的酶标仪，建议读数范用：0-3.0A。

【样本要求】

1 适用标本类型：血清。

2标木采集：应以无菌方式收集血清标本，不能溶血。在处理标木时，要求使用一次性的吸 管和吸管头，要谨慎防止交叉污染。为了得到最佳的结果，检查所有有泡沫的标木，在测试前 用棉签去除所有泡沫。为了避免交叉污染，每个标本使用一个新的棉签。标本应该去除纤维蛋 白、红细胞、颗粒性物质。在离心分离前，确保血清标本中有完整的血凝块形成。 一些标本。 特别是从对抗凝剂耐受或从接受血栓溶解疗法的病人中提取的血液标本，血块凝固的时间要延 长。如果标本在血凝块形成之前离心，由于纤维蛋白原的存在可能会导致检测结果错误。待测 样本不可用叠氮钠防腐。

3标本保存和运送：如果样本保存时间超过24小时，请从血液中移除血凝块、红细胞、将血  清分离取出。短时间内测试可贮藏在2-8℃条件下，血清标本最多能保存7天。如果测试等待时 问要超过7天，标本需要储存在-20℃或更低的温度。标木储存在-20℃冰冻的条件下，将保持 12个月的稳定性。运输时，标本必须采用符合国家或国际对运输临床标本和传染性物质法规的 包装和标记。标本应在冷藏或冰冻(干冰)的条件下运输，建议在运输前将血清分离取出。标本 应避免多次冻融。

【检验方法】

1 试剂准备：

(1)试剂平衡：取出试剂平衡至室温。

(2)配制洗液：将浓缩洗液用去离子水作1:25稀释。

2加样：每孔加入100μL样品稀释液，然后分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照 10μL。阴、阳性对照各做两个复孔。

3温育：用封板膜封板，振荡2-5分钟混匀后置37℃孵育30分钟。

4洗涤：用洗液冲洗6次，拍干。

5加酶：每孔加入酶结合物100μL。

6温育：用封板膜封板，振荡2-5分钟混匀后置37℃解育30分钟。

7洗涤：用洗液冲洗6次，拍干。

8显色：每孔加入底物A、B液各50μL, 振荡混匀，37℃避光显色15分钟。

9测定：每孔加入50 μl终止液，轻拍混匀。设定酶标仪波长于450nm 处(建议使用 450nm/630nm 双波长检测),测定各孔OD 值。

【阳性判断值】

Cutoff 计算：Cutoff= 阴性对照OD值的平均值+0.10(阴性对照450nm OD值的平均值小于 0.05时按0.05计算)。

阳性判定：样品OD 值≥Cutoff者判为阳性。

阴性判定：样品OD 值<Cutoff者判为阴性。

【检验结果的解释】

每个包被板上应采用阴、阳性对照进行质量控制，其中阴性对照复孔OD 值均应小于0.15, 阳性对照平均OD 值应大于0.8。

如不能满足上述条件，则此包被板的试验结果无效，试验需重新进行。

【检验方法的局限性】

1本试剂盒适用于人血清样本的检测，不适用于其他体液的检测。

2本试剂盒检测结果必须结合临床信息进行分析。

3本产品检测结果仅供临床参考，不应作为临床确诊依据，单项检测指标不足以说明发热伴 血小板减少综合征病毒感染过程，需结合其它感染指标及临床症状判断。

4检测结果为阴性的不能排除病毒感染的可能，高滴度的SFTSV-IgG 抗体会与特异性SFTSV-

IgM竞争抗原结合部位，会使检测试剂的敏感性降低，IgM 结果可能会出现假性低值或者阴性结果。 5对检测结果为阳性的样本应复检或使用不同的方法学进行确认，感染初期，SFTSV-IgM 未  产生或滴度很低，会导致阴性结果，患者应在1~2周内复查，抽取第2份样本，复查时同时平行 检测上次采集的血清以确定是否有初次感染的血清转化或SFTSV-IgM 抗体明显升高。

6免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，其血消学抗体检测的参考价值有限，可能会导 致错误的医学解释。

7由于孕妇的实验室检查不能可靠地鉴定胎儿患病的风险，故不建议采用本试剂对无症状的 母体感染进行筛查，不得将本试剂的检测结果单独作为终止妊娠的依据。

【产品性能指标】

1 分 析 性 能

通过对厂内参考品的分析测定，本试剂盒分析性能如下：

1)厂内阴性参考品符合率：检测企业参考品中的15份阴性参考品，阴性结果应不少于14份。 2)厂内阳性参考品符合率：检测企业参考品中的10份阳性参考品，检测结果应均为阳性。

3)灵敏度：检测3份不同稀释度的最低检测限参考品，阳性稀释度应不低于1:8。 4)精密性CV(%): 重复性参考品平行测定10孔，要求CV≤15%。

2交义反应

通过对HIV:HBY:HCV   感染者典清及RF 阻性血清进行测定，本试剂盒交叉反应如下；

3抗干扰能力

本试剂盒检测时不受甘油三酯(20mg/mL)、 胆红素(0.4mg/mL)  血红蛋白(10mdmL) 的手抗。

4药物影响

肝素治疗病人的血清样本可能由于部分凝固而存在纤维蛋白丝，因此句能产生错误的检测

结果，为防止这种现象发生，在肝素治疗前便取样。

【注意事项】

1 请严格按照操作说明书操作。

2不同批号的试剂盒不要混用。

3本试剂盒各组分只能一次性使用，不能重复使用。

4整个实验过程应尽量建立在干净无尘的环境下进行。

5本试剂盒与待检样木使用前必须平衡至室温。

6浓缩洗液使用前需25倍稀释，若洗液出现结晶，可置37℃使之溶解。

7洗板机在每天使用时应进行校正注液量和残留量，注意管道是否通畅。洗涤时，确认每孔 中的洗涤液都注满微孔。每次洗涤后都需在无尘吸水纸上拍干微孔中的液滴。

8为了避免样本中任何潜在的生物危险，检测样本应视为具有传染性物质，避免接触到皮肤 和粘膜。

9本试剂盒中所有试剂应置于2～8℃保存，以产品检验合格出厂日期起有效期为12个月。开

启后请尽量避免反复使用，板条若未能一次用完，剩余板条应立即用自封袋(内装干燥剂)封口 后2～8℃密封保存。

10对低浓度抗体水平样本检测可能出现假阴性结果，如对实验结果有疑问，应重复实验。