摘要：目的探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)抑制剂对颅脑创伤(TBI)大鼠血脑屏障(BBB)通透性改变和脑水肿的影响。 方法将99只大鼠分为对照组、TBI组和干预组（分为6、24、48、72、168 h亚组），复制大鼠液压打击模型，干预组给予西维来司钠，分别测定各组脑组织NE的浓度、BBB通透性和脑组织含水率，并进行}匕较分析。结果 TBI组和干预组大鼠脑组织NE浓 度、BBB通透性和脑组织含水率在各时间点都高于对照组，干预组的NE浓度在24、48、72、168 h低于TBI组，BBB通透性和脑组织含水率在48、72、168 h低于-I-BI组(P<0.05)。结论 西维来司钠能抑制TBI大鼠脑组织jE的释放，降低BBB的通透性并减轻脑水肿发生，表明西维来司钠对大鼠TBI继发性损伤有保护作用。
 关键词：颅脑损伤；蛋白酶抑制蛋白质类，分泌；西维来司钠；脑水肿
 中性粒细胞弹性蛋白酶( neutrophil elastase，NE)是广泛 存在于中性粮细胞、肥大细胞和巨噬细胞内的一种基质金属蛋白酶，在机体的损伤、炎症等生理、病理过程中发挥着重要作用‘1。作为一种丝氨酸蛋白水解酶，NE可以降解胶原蛋白、 弹性蛋白、纤维连接蛋白等，增加毛细血管通透性‘明。研究者 还发现，NE可以通过降解细胞外基质和破坏内皮细胞增加血脑屏障( blood brain barrier，BBB)通透性‘胡。西维来司钠是 NE的特异性抑制剂，能够抑制NE的生物活性，减少炎性介质 的产生和聚集，改善能量代谢障碍等，对肝脏、肺、心等组织、器官的损伤有显著的保护作用‘胡，但是对颅脑损伤( traumatic brain inj ury，TBI)的继发性损害有无保护作用少见报道。本研 究采用液压打击制作TBI大鼠模型，西维来司钠作为干预因 素，检测大鼠脑组织的NE浓度、BBB通透性以及脑组织含水率的动态变化，探讨西维来司钠对脑组织NE浓度的变化和颅脑损伤后BBB通透性改变和继发性脑水肿的影响。

1材料与方法
 1.1材料
 1．L 1 动物 雄性健康SD大鼠99只，体质量200～250 9，由重庆医科大学动物实验中心提供。
 1.1.2仪器与试剂 西维来司钠由重庆医药工业研究院提供。大鼠NE定量检测试剂盒ELISA胸自深圳晶美生物工程有限公司。微量输液泵购自江苏沙洲实验仪器厂；台式离心机 购自上海鸽牌；721分光光度计购自上海光电。
 1.2方法
 1.2.1分组将99只SD大鼠分为对照组（9只）、TBI组和干预组（各45只），其中TBl组和于预组又按6、24、48、72、168h时间点分为5个亚组，每亚组9只大鼠，大鼠适应性喂养3d，造模后SD大鼠按亚组分笼饲养，正常喂食、喂水。干预组于造模后经股静脉用微量输液泵按10 mg．kg-1．d_1，以1mL/h的流速持续输注，给药时间不超过24 h；TBI组造模后 和对照组都经股静脉用微量输液泵按1 mL．kg-l．h-的流速持续输注，给药时间同干预组。
 1.2.2 TBI模型制作 按Thompson等‘51方式制作模型，用100 g/L水合氯醛(3 mL/kg)经腹腔麻醉大鼠，立体定位仪固定大鼠头部，沿头皮正中作切口，剥离骨膜，取前囟人字缝尖连线中点偏左0.4 cm颅骨钻孑L，暴露硬脑膜。打击管内注水后连接液压脑创伤打击装置，造成TBI。
 l.2.3脑组织NE的测定 3组大鼠分别于相应时间点，用水合氯醛麻醉，快速断头取脑，取脑组织精确称重，置于-70C保存备测。测定时将脑组织用生理盐水在冰浴环境内以玻 璃匀浆器制成10%的脑组织匀浆。采用ELISA测定NE。
 1.2.4 BBB通透性的检测3组大鼠于预定的时间点经股静 球按5 mL/kg标准注射2%伊文氏兰(Evanf s blue，EB)，60min后，处死大鼠，取大鼠脑组织通过分光光度计检测渗出 的EB。
 1.2.5脑组织含水率测定3组大鼠在预定时间点，经水合 氯醛麻醉后，迅速断头取脑，将取出的脑组织放在用生理盐水浸润过的滤纸上，以防止水分蒸发。去除软脑膜，精密称重。 将脑组织置于95℃恒温烘箱24 h，再称取干重。按Blliot公 式计算脑组织含水率一（湿重一干重）／湿重×100%。 1.3统计学处理 采用的SPSSl7.o统计软件进行统计学分析，计量资料以j±s表示，进行￡检验，以P<O. 05为差异有统计学意义。

2结 果
2.1各组大鼠脑组织内NE浓度的比较TBI组和干预组在5、24、48、72、168 h大鼠脑组织内NE浓度高于对照组(P<：’-05)；干预组在24，48、72、168 h低于TBI组，差异有统计学意义(P<0.05)， 2.2各组大鼠脑组织EB浓度的比较TBI组和干预组大鼠 癌皮质EB浓度在624、48、72、168 h高于对照组，差异有统计 学意义(P<0.05)；干预组在6、24 h脑组织EB低于TBI组，但差异无统计学意义(P>0.05)，在48、72.168 h低于TBI组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。 2.3各组大鼠脑组织含水率的比较TBI组和干预组大鼠脑含水率在24、48、72、168 h高于对照组，差异有统计学意义P<0.05)；干预组在6、24 h脑组织含水率浓度低于-、BI组，但差异无统计学意义(P>0.05)，在48.72、168 h低于TBI组，差异有统计学意义(P<0.05)。
 
3讨 论
 BBB通透性改变和脑水肿是TBI继发性脑损伤的主要病理性变化，成为影响伤情发展和预后的重要因素。分子生物学研究发现NE作为一种最重要的炎症介质， 广泛参与BBB通 透性改变和脑水肿发生发展的生理病理过程中。研究发现，NE可以损伤细胞外基质，增强黏附因子表达，加重内皮细胞 损伤，增加IL8、-I-NF-“、氧自由基的产坐，活化激肽、缓激肽、 花生四烯酸等导致内皮细胞的损伤‘6]。NE的特异性抑制剂西维来司钠已经成功研制并运用于临床，对各种实验性急性肺损伤具有良好的保护作用，目前主要用 于治疗全身性炎症反应 综合征、慢性阻塞性肺气肿等疾病。近年来，日本学者研究 还发现西维来司钠能够减轻肝脏部分切除后的肝脏损伤，能够 减少高迁移率族蛋白1( HMGBl)的释放和降低IL-6的水平，与对照组比较，能够更加有效的促进患者恢复。有学者通过体外试验研究还发现西维来司钠可以通过减少C3、C4的 激活 对肾脏起到保护作用。