肿瘤是中国乃至全球最常见、病死率最高的疾病之一。肿瘤组织是人类对肿瘤发生、发展和转移机制进行探索的最直 接、最具体的研究对象，为了能够系统的收集、管理、并且有效 利用这些肿瘤组织，建立肿瘤组织样本库( tumor tissue bank， TTB)。胡。肿瘤组织样本库的建立能够系统、规范、科学收集、 保存手术切除的肿瘤组织、采集肿瘤患者相关体液及汇总相关 病理类型、临床分期和治疗效果等方面信息的平台[34]。本院 肿瘤组织样本库自2012年成立以来，在临床科室、麻醉科、手术室的大力配合下已经初具规模，初步形成组织样本的标准化 收集、储存和管理的体系，已经收集各类手术中产生的组织样 本包括肿瘤组织、癌旁组织、远端正常组织、正常组织和各类体 液样本。随着肿瘤组织样本库的发展，也出现了许多问题，作 者就现在组织样本库目前的问题进行探讨，以期有助于样本库 标准化、规范化的发展。

1.肿瘤组织样本库的现状及建立的意义近几年，生物样本库的发展日新月异，世界上很多发达国 家已经建立了自己的肿瘤组织样本库，并且还渐形成了规范化、标准化、规模化的体系。知名度比较大的包括日本生物样 本库( biobank Japan)，其主要特点是收集住院患者组织和普通 人群，侧重常见疾病的研究及药物实验。欧洲生物样本库(biobanking and biomolecular resources reasearch infrastruc-ture)，其主要特点是网络型样本库、包括欧盟24国家超过200个机构，目前已经存有样本量大于1千万份。新加坡组织网络( singapore tissue network)，其主要特点是收集组织与DNA样 本，为特定研究项目收集提供样本。英国生物样本库(UKbiobank)，启动于2006年，主要收集普通人群样本。在我国， 近几年我国一些医院也相继成立了样本库，比如天津肿瘤医院、中山大学肿瘤医院、北京肿瘤医院。与发达国家相比，有优 势，也存在很多劣势。优势在于我国地大物博，人口众多，疾病 的种类也十分繁多，资源丰富，每年肿瘤发病病例约200万例， 死亡病例约150万例。我国生物样本库的劣势主要是每个样 本库都是以个体为中心，缺乏规范化的管理，缺乏资源的共享，对组织样本不能有效的利用，导致资源的浪费。建立生物样本 库酌意义是为了整合资源，应用于以包括流行病学、疾病的分 子病理机制、发生、发展及预后分析、个性化治疗方案的建立、 疗效的随访、药物敏感性研究及新药开发等的研究。

2.建立标准化的生物样本库
2.1标准化的采集和储存生物样本标准化的采集组织样本 是组织样本库的核心内容，是获得稳定、可靠的科研结果的保障。
按照国际标准化操作程序(standard operation procedure， SOP)，样本库建立的基本工作流程如下：(1)获得所在医疗机构伦理委员会批准。(2)手术前同患者签署样本留取知情同意 书。(3)向手术室和病理科提交样本收集申请。(4)手术中切除的样本置于冰盒里迅速送至病理科，病理科对组织进行常规的登记，样本库技术人员在保证病理诊断的前提下进行取材， 存人样本库的组织包括肿瘤组织、癌旁组织、远端正常组织和良性组织。(5)每天手术结束后将ld收集的样本用液氮罐转运回样本库放入-80℃冰箱长期保存，做好电子版和纸质版 登记备份。

组织样本取材与储存的注意事项：(1)需要严格控制低温时间，手术中取出组织从离体到冻存所需时间差越短越好。TuBa Frost的标准是30～120 min，主要目的是尽量缩短组织缺血的咐间，保证细胞内外渗透压，减少组织的降解。 保证上述的要求需要外科医生、病理医师和技术人员的密切配 合。研究指出组织取出后5～10 min内冷冻，基因就已经开始 改变；15 min后有10%～15%的基因改变；30 min后有20%以 上的改变朝。但也有研究表明，基因表达的改变与组织从取出到冷冻之间的时间间隔并无直接关系，然而为了保证样本质量，期间时间间隔还是愈短愈好。经过许多实验室反复实验论证，组织离体后20 min内冻存的样本可获得比较稳定的基 因表达明。(2)冻存组织取材大小5 mm×5 mm×5 mmL7]。 (3)为避免组织交叉污染。每次取材应使用干净、消毒的器械， 取正常和肿瘤组织要使用两套不同器械。(4)长期储存组织应 放于-80℃冰箱或液氮罐内可保证组织的质量，温度越低组织 保存的时间越长，但也有研究分析指出-80℃长期保存的组 织DNA比较稳定，保存期超过5年RNA就有所改变。放置于气态的液氮罐中的组织超过10年，RNA也相对稳定。 (5)样本库技术人员都要经过专业培训，认真学习相关病理知 识、手术室无菌操作规范，并且佩戴专业保护装置，如手套、护目镜等，同时要避免感染艾滋病、肝炎、结核筹。

2.2 样本的质量控制 低温冻存被公认为是组织与器官长期
保存最有效的方法。其原理是通过降低细胞的代谢率起到保 护组织细胞的作用。对于低温样本的质量控制可直接影响组织样本的使用效率，为了更加有效的利用这些组织样本，此程 序主要由样本库技术人员进行严格把关。样本库技术人员在病理科人员的协助下共同取材，并对所取组织样本进行病理学鉴定，若组织切片中肿瘤成分超过75%则认为质量良好，如不足65%则可能影响研究结果[89]。对储存于生物样本库的病例应进行定期临床随访，以便获得疾病治疗效果、临床进展及是否生存等重要资料。对于低温冰箱应做好日常的维护工作，定时记录低温冰箱的温度，并且在样本库所在房间配备双电源及低温冰箱报警系统来确保样本的安全。对于液氮罐需要随时检查液氮量。众多研究显示，长期冻存对于DNA大分子的稳定性影响不大，甚至石蜡包埋组织块中的DNA也可进行分 子生物学分析。RNA分子则易被广泛存在于细胞内、皮肤、唾液、汗液及周围环境中的RNA酶所降解。使用液氮保存是保 存RNA活性的最理想方法，当温度降至液氮温度时，细胞 组织中所有的生物化学、生物物理过程均处于停止状态但限 于空间及经费等原因，大型液氮储藏罐或液氮冰箱尚难以推广 普及。

2.3样本的信息化簪理组织样本的科学价值并不只是在于 其是采用先进的方法采集，高质量的冷冻和存储，更在于其相 应保存了完整的临床数据。重庆医科大学附属第一医院利用定制的生物样本库管理软件对在库的组织样本进行系统、规范 的管理。样本库管理软件的主要特点：(1)采用个性化设置，可根据所在机构对样本信息的需求自定义软件。本库根据自身 定制的样本库管理软件包括以下3个方面信息：病案信息、病历信息、样本信息。病案信息包括患者姓名、性别、生日、年龄、 随访信息，影像信息、联络方式、身份证号；病历信息包括手术日期、手术科别、手术医生、手术名称、临床诊断、肿瘤的TNM分期；样本信息包括样本种类、次级分类、是否原发、转移、肿瘤 性质、样本质地、样本颜色、取材员姓名、组织的离体时间、取材 时间、低温时间、有无化疗以及化疗方案。