流式细胞仪

基本结构

组成

流式细胞仪主要由四部分组成。它们是：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。上图为其结构示意图。

流动室和液流系统

流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。

激光源和光学系统

经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。常用的光源有弧光灯和激光；激光器又以氩离子激光器为普遍，也有配和氪离子激光器或染料激光器。光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。汞灯是最常用的弧光灯，其发射光谱大部分集中于300～400nm，很适合需要用紫外光激发的场合。氩离子激光器的发射光谱中，绿光514nm和蓝光488nm的谱线最强，约占总光强的80%；氪离子激光器光谱多集中在可见光部分，以647nm较强。免疫学上使用的一些荧光染料激发光波长在550nm以上，可使用染料激光器。将有机染料做为激光器泵浦的一种成份，可使原激光器的光谱发生改变以适应需要即构成染料激光器。例如用氩离子激光器的绿光泵浦含有Rhodamine6G水溶液的染料激光器,则可得到550～650nm连续可调的激光，尤在590nm处转换效率最高，约可占到一半。为使细胞得到均匀照射，并提高分辨率，照射到细胞上的激光光斑直径应和细胞直径相近。因此需将激光光束经透镜会聚。光斑直径d可由下式确定：d=4λf/πD。λ为激光波长；f为透镜焦距；D为激光束直径。色散棱镜用来选择激光的波长，调整反射镜的角度使调谐到所需要的波长λ。为了进一步使检测的发射荧光更强，并提高荧光讯号的信噪比，在光路中还使用了多种滤片。带阻或带通滤片是有选择性地使某一滤长区段的光线滤除或通过。例如使用525nm带通滤片只允许FITC（Fluoresceinisothiocyanate,异硫氰荧光素）发射的525nm绿光通过。长波通过二向色性反射镜只允许某一波长以上的光线通过而将此波长以下的另一特定波长的光线反射。在免疫分析中常要同时探测两种以上的波长的荧光信号，就采用二向色性反射镜，或二向色性分光器，来有效地将各种荧光分开。

光电管和检测系统

经荧光染色的细胞受合适的光激发后所产生的荧光是通过光电转换器转变成电信号而进行测量的。光电倍增管（PMT）最为常用。PMT的响应时间短，仅为ns数量级；光谱响应特性好，在200～900nm的光谱区，光量子产额都比较高。光电倍增管的增益从10到10可连续调节，因此对弱光测量十分有利。光电管运行时特别要注意稳定性问题，工作电压要十分稳定，工作电流及功率不能太大。一般功耗低于0.5W；最大阳极电流在几个毫安。此外要注意对光电管进行暗适应处理，并注意良好的磁屏蔽。在使用中还要注意安装位置不同的PMT，因为光谱响应特性不同，不宜互换。也有用硅光电二极管的，它在强光下稳定性比PMT好。

从PMT输出的电信号仍然较弱，需要经过放大后才能输入分析仪器。流式细胞计中一般备有两类放大器。一类是输出信号辐度与输入信号成线性关系，称为线性放大器。线性放大器适用于在较小范围内变化的信号以及代表生物学线性过程的信号，例DNA测量等。另一类是对数放大器，输出信号和输入信号之间成常用对数关系。在免疫学测量中常使用对数放大器。因为在免疫分析时常要同时显示阴性、阳性和强阳性三个亚群，它们的荧光强度相差1～2个数量级；而且在多色免疫荧光测量中，用对数放大器采集数据易于解释。此外还有调节便利、细胞群体分布形状不易受外界工作条件影响等优点。

计算机和分析系统

经放大后的电信号被送往计算机分析器。多道的道数是和电信号的脉冲高度相对应的，也是和光信号的强弱相关的。对应道数年纵坐标通常代表发出该信号的细胞相对数目。多道分析器出来的信号再经模-数转换器输往微机处理器编成数据文件，或存贮于计算机的硬盘和软盘上，或存于仪器内以备调用。计算机的存贮容量较大，可存贮同一细胞的6～8个参数。存贮于计算机内的数据可以在实测后脱机重现，进行数据处理和分析，最后给出结果。除上述四个主要部分外，还备有电源及压缩气体等附加装置。

其原理是在一组混合的细胞群中，加入特异的针对特定靶细胞表面分子的荧光标记单克隆抗体，这种特异单克隆抗体与其对应的抗原靶分子结合，结合后的荧光标记抗体停留在特定细胞的表面，称为荧光抗体标记的靶细胞；将含有被标记细胞的混合细胞群混悬在一定容积的上样缓冲液中，再通过FACS的进样吸管孔，仪器就会将细胞悬液制成以单细胞排列的微细流束。

当每一个细胞通过仪器的激光束照射时，带在细胞上的荧光就会被相应的激光束激活并发出对应的荧光，通过敏感的光电倍增管即可检测到从细胞表面发出的荧光。根据测得的散射光（scatteredlight）可得到细胞大小及颗粒状态的信息；而从荧光的发射强度（fluorescenceemissions）则提供了结合在细胞上的抗体信息，进而也被反映了该细胞表面相应分子的表达情况。

在流式细胞仪分离装置中，返回到计算机的信号，可用来产生一种电荷，这种电荷以特定准确的时间通过FACS的吸管孔，在与吸管孔的液体流相相遇时，可将液体流打碎成只含一个细胞的微滴。含有电荷的微滴就会从主液体流中偏移，穿过一双极板。带正电荷的微滴被吸引至阴极，而带负电荷的被吸引至阳极。以这种方式，特定的细胞亚群由于标记着不同的荧光抗体而带有不同的电荷，从而将目的细胞从混合的细胞群中分拣出来。

1.免疫细胞群的分类静止淋巴细胞之间从其外观形态难以区分，都是以致密的核及少量细胞质组成的小而圆的细胞为特征。然而，这些细胞确是由功能各异的不同细胞亚群所组成，各种细胞群表达各自特殊的表面分子。例如，B淋巴细胞上表达有特异的膜表面免疫球蛋白（mIg），而成熟的T淋巴细胞表面表达特异的CD3分子。T淋巴细胞又可进一步按其表达的不同表面标志细分成不同的亚群，如CD4+CD8-和CD4-CD8+亚群。因此，可由这些特征性的表面标志，将细胞分为不同的群或亚群。

2.免疫细胞的分化发育免疫细胞分化发育的不同阶段，其表面标志也在不断地发生着变化。如胸腺细胞（发育过程中的T淋巴细胞），在发育的不同阶段从不成熟到成熟，其表面标志经历了从双阴性（CD4-CD8-）到双阳性（CD4-CD8-），直到单阳性（CD4+CD8-或CD4-CD8+）的过程。正常生理状态下，发育不同阶段的胸腺细胞以一定的比例存在于胸腺中。通过检测这些标志，即可判定某些因素（基因突变等）对胸腺细胞发育的影响。

3.免疫细胞的分子表达免疫细胞的不同因素的影响下，其表达的分子也会发生变化。通过检测这些分子的变化，可分析细胞功能以及细胞分化状态等。例如，静止的T淋巴细胞不表达或低水平表达CD69分子；而一经活化，其表达CD69分子数量明显增加。因此，可通过检测这些活化标志的变化来判定细胞状态以及研究影响细胞活化状态的因素。

4.免疫细胞的分离如前所述，免疫细胞是一组极不均一的群体。所以在研究免疫细胞功能时，常常需要把某些特异的细胞分离和纯化。虽然免疫细胞分离的方法很多，但用FACS来纯化特定的细胞群是目前最为有效和方便的手段。例如，最近颇受关注的CD4+CD25+T淋巴细胞是一群具有免疫调节（免疫抑制）功能的细胞群。在对其特点及功能进行研究时，首要的问题是分离该细胞群。用相应的单克隆抗体与其结合，再用FACS进行分离，就能得到纯度很高CD4+CD25+T淋巴细胞细胞群。而其他分离方法不仅分离过程烦琐，也很难控制无菌条件及保证细胞纯度。

美国贝克曼库尔特有限公司开发和销售仪器，生化，软件以及能够简化和自动化实验室处理的产品。我们的产品能够支持在与疾病战斗的各个阶段的生物医学分析－从前沿医学研究到患者血液检测。在2010年，公司销售额为$37亿，其中87.6％的销售额来自临床诊断市场，12.4％来自生物医学研究市场。

贝克曼库尔特提供了一个广泛的分离，检测和分析生命组成部分的仪器业务。在医院临床实验室中，我们可以提供实际意义上的各种常规血液检测以及75％的其它检测。我们的70％以上的产品都保持在市场高端位置上：血液学，常规生化系统，离心，毛细管电泳，蛋白质分析，生物机器人以及快速检测。

贝克曼库尔特Gallios流式细胞仪产品介绍：

主要特点

●高精尖的全自动的10色分析提高了科研的精度

●全新一代高速、高分辨率、高精度数字数据处理系统

●样品制备实现了自动化、进而最大限度地加快了研究速度

●真正支持当前流式发展趋势（多参数、小颗粒检测、弱荧光表达、稀有细胞、自动化高通量上样）

贝克曼库尔特MoFlo XDP超速流式细胞分选系统产品介绍：

仪器特点

●MoFlo XDP电子的死时间缩短到零，检测速度快，灵敏度高。其分析速度＞100，000细胞/秒，分选速度＞70，000细胞/秒(在任何数量荧光和补偿下)。如果用多激光配置，它对每个细胞都能获得和分析18个荧光参数和2个散射光参数。

●四通道分选，能同时分选4种不同的细胞亚群

●喷嘴种类有8种，50μm-200μm

仪器适用范围：

●最佳检测和分选细胞大小范围：0.5-50um

●细胞种类：真核细胞（组织分离细胞、细胞系、血液、骨髓、体液细胞等）

●可应用的荧光素标记物：FITC/PE/PE-TexasRed/PE-Cy5/PE-Cy7/APC/APCCy5.5/APC-Cy7/DAPI/QDot625及符合上述激发光及发射光检测滤片的荧光素

仪器主要应用：

●基于细胞表型的分析分选

●基于细胞浆或细胞核（胞内）蛋白的分析分选

●基于DNA倍体的细胞周期分析分选

●基于代谢（如SidePopulation，SP）细胞的分选

●有标记物的几乎任何细胞的分析分选都可以进行

贝克曼库尔特EPICS XL/XL-MCL流式细胞仪（四色）产品介绍：

主要特点

●EPICS XL系统为封闭系统，能防止生物危害。

●EPICS XL系统具备最新技术成果（state-of-the-art）的数码信息处理功能，可保证可靠的线性和无漂移的信息放大及颜色补偿作用，从而使该系统得以选择可靠的荧光强度和进行多位点研究。

●在颜色补偿计算过程中采用了完整的四路补偿矩阵。

●对样品检测量大的用户，XL-MCL系统提供非常便利的多管样品旋转进样盘，每小时可检测100份样品。

●XL-MCL系统能使待检样品被抽吸前即已达到标准的充分混匀，并可通过条形码识别三通道阳性样品。

●XL及XL-MCL两型流式细胞仪共同使用的标准SystemⅡTM软件可使四色检验的标准化和颜色补偿全部自动化。

●用户可根据不同的研究要求使用可更换的滤色片，使该仪器得到广泛的研究应用。

XL系统的研究应用领域

四色免疫荧光多参数DNA分析血小板研究、

细胞生物学及功能的研究

贝克曼库尔特Cytomics FC 500流式细胞仪（五色）产品介绍：

主要特点

●为研究性实验室设计了精密的、高效的操作程序

●采用单激光或双激光激发方式，可进行5色分析

●配备共线性（collinear）第二激光，以便对抗体和荧光色素的选择具有

更大的灵活性，排除延时计算的需要和伴随的空间-分离光束干扰

●CXP软件可进行自动的数据获取和应用设置

●自动化调控装置

●多种进样方式（CL进样、MCL手动、MCL自动、单管手动进样，PL进样，可使用24孔、48孔、96孔板及EP管，同时可使用12X75

试管）

●简明的补偿设置及其调节

应用范围

5色树状细胞分析、5色钙离子流动分析、可溶性细胞因子检测、5色白血病/淋巴瘤细胞分析、GFP应用、血小板GPIIb/IIIa受体定量分析

EPICS XL/XL-MCL流式细胞分析系统产品介绍：

第一台单激光发四色荧光的流式细胞仪

保证所有信号来源同一细胞

第一台数字化的流式细胞仪

采用数字信号进行对数转换，使信号保持极高的线性度和重复性

第一台采用光纤通讯的流式细胞仪

避免信号传输中的失真

第一台利用软件进行ADS（优化数字补偿）方式的流式细胞仪

去除所有荧光染料发射光谱之间的干扰，保证结果的准确性

第一台可互换式光学滤片设计的分析型流式细胞仪

可互换式光学滤片，无需进行光路调整，保证新染料的应用

第一台具有全程质控的流式细胞仪

除常规质控品外，尚有全自动质控程序，绘制质控图，出控报警，质控参考值设定，质控结果比较

第一台利用生物样本进行补偿的流式细胞仪

具有补偿向导，指导用户利用生物样本进行颜色补偿

EXPO 32 ADC数据采集与分析软件（Windows界面）

Windows环境下EXPO32 ADC软件，在当今信息产业时代为现有的XL用户提供了更为精确的颜色补偿方式。ADC意为Advanced Digital Compensation（优化的数字补偿法）。采用反转矩阵补偿，它与单激光4色分析结合，为客户提供最佳的分析方法，为患者提供更准确的结果。有其更灵活的特点，可读取任意厂商的FCS格式的存储文件。与OF-FICF应用软件完全兼容。

管理界面，多重用户目录，并可利用密码加以保护

利用鼠标直接拖曳已存储的方案及Listmode，Histogram文件

将统计结果直接输出至EXCEL文件

将图形直接拖曳至Word及Powerpoint文档

无限制的直方图加，并可显示统计结果

二维及三维分析

4种不同的点图分辨率64*64 128*1228 256*256 512*512

快速补偿及补偿向导

PRISM浓缩柱形图，将4色分析的16个结果同时显示

多重文件分析，Flow PAGE工作报告

Flow Center工作站

lntel pentium lll cpu

256mb ram

30G硬盘

40*ide cd-rom

G450显卡

可连接双显示器

多种规格显示器选择

PCI 10/100以太网卡

其它软件

System 11软件

TetraOne全自动四色分析软件

ReticOne全自动网织红细胞分析软件

StemOne全自动造血干细胞分析软件

Multicycle for windows dna分析软件

多种型号的标本制备仪选择

Q-prep免疫标本制备仪

DNA-prep：DNA分析标本制备仪

TQ-prep:32管样本制备仪

Prep-Plus11：完成全自动加样过程

FC 500流式细胞分析系统产品介绍：

保留XL的先进设计特点

光纤通讯、数字化信号传递、优化的全矩阵颜色补偿，可互换式光学滤片，更换滤片后无需调校光路

全新技术

20比特100万道数据分析

光电倍增管PMTs（光谱监测范围185-900nm）对红光检测更敏感

全新光路设计，最大限度减少光损失

单激光激发5色荧光

双激光（可选择第二根激光）激发5色荧光，可选择更多的染料

可选择96孔板进样方式（MPL），也可进行24孔板进样，EP管进样及普通试管进样

3种模式的进样选择

FS收集角度的选择：1°-8°or1°-19°

软件特点

工作站-Pentium IV CPU，1.7GHz:Windows 2000界面

CXP/MXP数据采集及分析软件

-以FCS3.0格式存储的Listmode文件

-利用软件运行颜色补偿

-ListCOMP：可在Listmode文件重新调整颜色补偿

-AutoSetup:向导

-QuickSET:快速调整颜色补偿

-AutoGATE

-“point and click”设门方式

-阳性分析

Flowpage2

可利用拖曳方式将图形移到OFFICE文件

输出至PDF文件

品牌：达安

中山大学达安基因股份有限公司，是以分子诊断技术为主导的，集临床检验试剂和仪器的研发、生产、销售以及全国连锁医学独立实验室临床检验服务为一体的生物医药高科技企业。

流式细胞仪influx产品介绍:

发射光路和散射光路系统：

荧光发射光通过一个20倍、0.6NA(数值孔径)的显微物镜收集，光线聚焦于7个空间独立的镜面针孔。

模块化的检测器可由用户自由配置。

同时对液流、针孔和激光照射点成像观察，方便快速直观的调节。

常规前向角散射光由75和50mm的光圈可调镜头、PMT进行收集检测，检测空间分辨率0.5um。收集角度：2-17°可调。

微小颗粒(前向角)检测器(SPO)由一个20倍，0.42NA(数值孔径)显微物镜、镜面针孔和针孔检测器组成。SPO前向角散射检测空间分辨率&gt;0.2um。收集角度：2-30°可调。

侧向角散射光使用一个90度收集物镜和PMT检测，空间分辨率&gt;0.2um。

荧光检测灵敏度：FITC&lt;125 MESF

PE&lt;125 MESF

荧光检测分辨率：全峰宽CV&lt;3.0％

荧光线性：Doublet/singlet ratio:1.95–2.05

流式细胞仪AccuriC6产品介绍:

首先C6流式细胞仪能避免操作新手的一个容易犯的错误——调整电压，同步化不同的细胞。C6流式细胞仪采用的是专利低压流动系统(蠕动泵)而不是真空泵，因此可以精确控制样本进样速度和活性区流的直径，这就能为样本选择最佳的活性流区的大小。

C6的探测器不但可灵敏的捕获前散射光和旁散射光，还有四个可调光学滤光片的荧光探测器。可以实时收集1600万个通道的数据，宽的动态范围消除了对探测器进行补偿的必要性，当使用Cflow软件的Zoom function模式观察一个特定通道时，其他数据仍然被监测并且记录到数据文件。

安装和维护简单。系统拥有自动除污和清洗流路程序。当关闭主机时，自动化系统会自动用清洗液清洗流路系统，然后再使之充满鞘液。鞘液会保持在流路系统中，直到下次开机。在使用过程中，如果需要启动清洗流程，那么点击一下鼠标就可。

由于C6流式细胞仪不使用加压流动系统，可容纳多种类型的管子，包括任何品牌的12×75mm管和最微型的离心管(无盖)。

C6流式细胞仪系统设计小巧灵便(17.3寸宽x16.3寸深)，可在任何实验室配备。重量不到30磅，可方便移动，这是其他同种产品所不能达到的。

C6对电源电源(110V-240V、50-60HZ)没有特殊要求，不需要增加任何电源控制设备。

如果样品比较多，可选配自动进样装置。

Cflow操作分析系统，能简单快速的搜集分析数据，具有优良人机界面，研究人员经过半个小时的培训，就可以灵活、准确的使用C6流式细胞仪系统。

品牌：迈瑞

迈瑞是全球领先的医疗设备和解决方案供应商、美国纽交所上市企业，主要业务集中在生命信息与支持、体外诊断、数字超声、医学影像四大领域。迈瑞以“普及高端科技，让更多人分享优质生命关怀”为使命，致力于成为守护人类健康的核心力量。

迈瑞成立于1991年，总部设在中国深圳。位于美国西雅图、新泽西、迈阿密、瑞典斯德哥尔摩、中国深圳、北京、南京、成都、西安、上海的十大研发中心，把全球各种临床需求和先进技术融入持续的创新，帮助世界各地的人们改善医疗条件、降低医疗成本。

迈瑞在北美、欧洲、亚洲、非洲、拉美等地区的22个国家设有子公司，在中国设有32家分公司，员工近8000名，在全球形成庞大的研发、营销和服务网络。目前，迈瑞的产品和解决方案已应用于全球190多个国家，中国十万多家医疗机构、95%以上的三甲医院。

流式检测辅助试剂产品介绍：

105-004580-00流式细胞仪用溶血剂1*50ml

105-005386-00流式细胞仪用鞘液2*5L

105-004582-00流式细胞仪用清洗液1*50ml

105-004485-00流式多色质控微球1*2ml

HLA-B27试剂产品介绍：

HLA-B27检测双色试剂由HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE双色试剂（流式细胞法）和IgG2a-FITC/IgG1-PE双色同型对照（流式细胞法）组成，后者使用与前者相应单克隆抗体亚型一致的免疫球蛋白，和样本反应时，与前者有着相同的非特异性结合水平，但是与相应抗原无特异性的反应。作为对照试剂，可以排除前者试剂中单克隆抗体与样本的非特异性反应，从而提高检测的准确度。

人外周血细胞与该双色试剂避光孵育反应，荧光素偶联抗体与白细胞表面特异性抗原结合。采用溶血/洗涤的方式处理反应样本，最后将处理后的样本在流式细胞仪上进行检测。由于不同细胞抗原表达量不同，其结合的荧光素偶联抗体的数量会有差异，该样本液通过流动室时在激光照射下会被激发出不同发射波长的荧光，流式细胞仪对细胞的前向角散射光（FSC）、侧向角散射光（SSC）和荧光信号进行收集，根据样本细胞检测的前向角散射光、侧向角散射光和荧光强度等参数信息，对HLA-B27阴阳性结果进行判定。此外，该试剂采用HLA-B27/HLA-B7双抗体策略，可以有效降低HLA-B7抗原带来HLA-B27检测假阳性的干扰，进一步提高检测结果的准确性。

TBNK试剂产品介绍：

TBNK淋巴亚群全套分析由CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色试剂（流式细胞法）和CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC四色试剂（流式细胞法）两个四色试剂组成。人外周血样本与该四色试剂避光孵育反应，荧光素偶联抗体与白细胞表面特异性抗原结合，采用溶血/免洗的方式处理反应样本，最后将处理后的样本在流式细胞仪上进行检测。由于不同类型细胞结合不同种类和数量的荧光素，该样本液通过流动室时在激光照射下会被激发出不同发射波长的荧光，流式细胞仪对细胞的前向角散射光（FSC）、侧向角散射光（SSC）和荧光信号进行收集，根据样本细胞检测的前向角散射光、侧向角散射光和荧光强度等参数信息，对淋巴细胞中T淋巴细胞（CD3+）亚群、辅助/诱导T淋巴细胞（CD3+CD4+）亚群和抑制/细胞毒T淋巴细胞（CD3+CD8+）亚群、B淋巴细胞（CD3-CD19+）和NK细胞（CD3-(CD16+CD56+)）进行分类，还可以提供CD4/CD8比率。

BriCyte E6产品介绍：

BriCyte?E6自动进样机型：样本架一次性可容纳40管样本，提升大批量标本检测的自动化程度。并且具备自动混匀功能，确保优异的检测准确性和重复性。BriCyteE6随机标配2个样本架，用户可交替装载样本，简化操作，节约时间。

BriCyte?E6手动进样机型：1.5ml和2ml的微量离心管可直接上机检测，降低样本转换容器时丢失细胞和发生生物污染的几率。

流式细胞仪在使用前，甚至在使用过程中都要精心进行调试，以保证工作的可靠性和最佳性。调试的项目主要是激光强度、液流速度和测量区的光路等。

激光强度：除调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外，还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出为最大。

液流速度：可通过操作台数字显示监督，调节气体压力大小以获得稳定的液流速度。

测量区光路调节：这是调试工作的关键。需要保证在测量区的液流、激光束、90散射测量光电系统垂直正交，而且交点较小。一般可在用标准荧光微球等校准中完成。

流式细胞术中所测得的量是相对值，因此需要在使用前或使用中对系统进行校准或标定，这样才能通过相对测量获得绝对的意义。因而FCM中的校准具有双重功能：仪器的准直调整和定量标度。标准样品应该稳定，有形成份形状应是大小比较一致球形，样品分散性能良好，且经济、容易获得。常用标准荧光微球作为非生物学标准样品，鸡血红细胞做为生物学标准样品。微球用树脂材料制作，或标有荧光素，或不标记荧光素。所用的鸡血红细胞标准样品制作过程昭下：取3.8%枸橼酸或肝素抗凝的鸡血（抗凝剂：鸡血=1：4），经PBS清洗3次，再用5～10ml的1.0%戊二醛与清洗后的鸡红细胞混合，室温下振荡醛化24h，最后经PBS再清洗，贮4℃冰箱中备用。需要指出的是因为未经荧光染色，所测光信号为鸡血红蛋白的自发荧光。

仪器的操作和使用

①打开电源，对系统进行预热；

②打开气体阈，调节压力，获得适宜的液流速度；开启光源冷却系统；

③在样品管中加入去离子水，冲洗液流的喷嘴系统；

④利用校准标准样品，调整仪器，使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上，0和90散射的荧光强度最强，并要求变异系数为最小；

⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等，在同样的工作条件下测量样品和对照样品；同时选择计算机屏上数据的显示方式，从而能直观掌握测量进程；

⑥样品测量完毕后，再用去离子水冲洗液流系统；

⑦因为实验数据已存入计算机硬盘（有的机器还备有光盘系统，存贮量更大），因此可关闭气体、测量装置，而单独使用计算机进行数据处理；

⑧将所需结果打印出来。

操作和使用中的注意事项

1）光电倍增管要求稳定的工作条件，暴露的较强的光线下以后，需要较长时间的“暗适应”以消除或降低部分暗电流本底才能工作；另外还要注意磁屏蔽；

2）光源不得在短时间内（一般要1h左右）关上又打开；使用光源必须预热并注意冷却系统工作是否正常；

3）液流系统必需随时保持液流畅通，避免气泡栓塞，所使用的鞘流液使用前要经过过滤、消毒；

4）注意根据测量对象的变换选用合适的滤片系统、放大器的类型等；

5）特别强调每次测量都需要对照组。