免疫分析仪

化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。化学发光免疫分析仪包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基态时，同时发射出光子(hM),利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质（在反应剂激发下生成激发态中间体）直接标记在抗原（化学发光免疫分析）或抗体（免疫化学发光分析）上，或酶作用于发光底物。

1、化学发光标记免疫分析法

化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物——acridin ium ester(A E),是有效的发光标记物[3],其通过起动发光试剂(N aOH2H2O 2)作用而发光,强烈的直接发光在一秒钟内完成,为快速的闪烁发光(见图1)。吖啶酯作为标记物用于免疫分析,其化学反应简单、快速、无须催化剂;检测小分子抗原采用竞争法,大分子抗原则采用夹心法,非特异性结合少,本底低;与大分子的结合不会减小所产生的光量,从而增加灵敏度。

2、发光酶免疫分析法

从标记免疫分析角度,化学发光酶免疫分析(chem ilum inescen t enzym e imm unoassay,CL E IA),应属酶免疫分析,只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析完全相同[5]:以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体)进行免疫反应,免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光,用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AL P),它们有各自的发光底物。

1979年，芬兰Wallac公司研发部的Soini和Hemmila首次提出了建立稀土离子标记物的“时间分辨荧光免疫分析”理论。

1983年，Soini和Kojola首先开发出以镧系元素为示踪物的时间分辨荧光测量仪，建立了新的非放射性微量分析检测技术。同一年，Pettersson等人运用此仪器首次对人绒膜促性腺激素（hCG）进行了时间分辨荧光免疫分析。

1984年，Hemmila确定了DELFIA（解离增强镧系元素荧光免疫检测）这种时间分辨免疫分析技术方案，从而使DELFIA成为Wallac的专利技术。

1988年，加拿大CyberFluor公司的Diamandis创立了一种不同于DELFIA的时间分辨荧光免疫分析，即FIAgen（采用的是以Eu3+螯合物配基BCPDA为标记物，通过检测其与过量Eu3+形成的螯合物荧光进行定量）。

我国起步相对晚一些，在2003年，时间分辨荧光分析技术获得国家科技进步二等奖。

免疫分析仪适用范围该产品使用VITROS试剂采用体外定量、半定量及定量测量的方法对临床生化、免疫项目进行检测。

SMCTM技术在获得最优化的免疫检测效力的同时，操作流程其实相当简便，与传统的ELISA很相似，通过整合独特的洗脱步骤和灵敏的数字化检测，SMCTM技术相较于传统免疫检测技术，信噪比有了很显著的改善，使得我们可以在一个系统里同时检测低表达和高表达的蛋白靶标。

优点：使用镧系元素作为标记物，其在保证检测的灵敏度和特异性的基础上，通过时间分辨技术消除了背景荧光的干扰。检测多种抗原时可使用多种荧光素进行标记抗体，且灵敏度（标记物为Eu3+的检测灵敏度为10-18mol/well）和特异性均较高，较其他分析方法好。还有标准曲线剂量范围宽、自动化程度高、操作简便等许多优点。

缺点：试剂盒昂贵和易受内源性或外源性稀土离子的污染

1.使用环境：将仪器置于水平、稳固、洁净的地方。自然环境中稀土离子存在十分广泛，如空气灰尘和烟雾中，均有不同程度的含量，尤以北方地区为甚，所以应建立一个相对无尘的操作环境，防止器材、试剂和操作者在操作中不慎可能造成的污染。

2.操作时按照实验室安全工作准则，戴手套穿工作服，不得戴首饰，以避免潜在的危险；在实验中应该注意用电安全，不得触及带电部分；标本及其他废弃物的处理应遵守实验室相关规定，注意生物安全。

3.严格遵守操作规程，如仪器出现故障，立即向管理责任人或科室负责人报告，查明原因，及时处理，不得擅自“修理”，应登记“仪器设备使用登记”本。

4.当仪器不处于STANDBY或关机状态时，不能触及加样针、搅拌棒等仪器运动部分。

5.将血清标本吸入样品杯时，避免产生气泡或吸入凝块。

6.铕标记物是提高灵敏度、降低非特异性结合的关键，受标记方法、抗体浓度、稀土元素或其螯合物质量及标记中带来不均一性影响，每批标记物质量都有一定的差异，因此不同批号标记物敏感性不一，不能混用，且每次测定都需作标准曲线。

7.时间分辨荧光免疫分析技术的免疫反应与其他免疫反应的条件一样，易受pH、温度、时间等因素的影响。且TRFIA的免疫反应是在室温状态下不断振荡完成的，所以反应的室温等环境影响因素应严格控制。

8.TRFIA技术由于灵敏度极高，许多因素能够影响其准确度，因此在每一步的操作中都应严格按照操作规程进行操作。