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准备实验室环境:确保实验室环境干净整洁,避免污染。准备好所需的试剂、样本和实验仪器。
准备PCR反应体系:按照实验方案准备PCR反应混合液,包括引物、探针、DNA模板、酶和缓冲液等成分。确保反应体系的配比准确无误。
设置PCR程序:根据实验方案设置PCR程序,包括变性、退火和延伸等步骤的温度和时间参数。确保程序设置正确,以保证PCR反应的准确性和稳定性。
加载样品:将准备好的PCR反应混合液加载到PCR板中,同时加入负对照和阳性对照样品。确保每个样品都有正确标记,并避免交叉污染。
放置PCR板:将装有PCR反应混合液的PCR板放入实时荧光定量PCR分析仪中,确保板的位置正确,避免操作错误。
运行PCR程序:启动PCR程序,让实时荧光定量PCR分析仪按照设定的程序进行PCR反应。实时监测PCR反应过程中的荧光信号,记录数据。
数据分析:分析PCR反应的实时荧光数据,生成标准曲线并计算样品中目标DNA的相对含量。根据实验目的进行数据解读和结果分析。
清洁和维护:实验结束后,及时清洁PCR板和仪器,避免污染。定期对实时荧光定量PCR分析仪进行维护和校准,确保其正常运行。
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